Diagnóstico de Patógenos por qPCR

A PCR quantitativa (qPCR) amplifica um segmento curto de DNA ou RNA específico do patógeno através de ciclos repetidos de replicação enzimática, enquanto mede o sinal fluorescente em tempo real, confirmando a presença do patógeno e estimando sua quantidade relativa na amostra a partir do número de ciclos de amplificação necessários para ultrapassar um limiar de detecção, sendo que menos ciclos significam uma carga patogênica inicial maior. Essa combinação de velocidade (resultados em horas, em vez dos dias exigidos para o diagnóstico bacteriano baseado em cultura), alta sensibilidade (capaz de detectar cargas infecciosas bem abaixo do que causa sinais clínicos visíveis) e quantificação tornou a qPCR o método de diagnóstico de primeira linha dominante para patógenos virais como o WSSV em camarões e vários vírus de peixes notificados que são difíceis ou impossíveis de cultivar por métodos laboratoriais tradicionais. Uma limitação crítica que os compradores de serviços de diagnóstico devem entender é que a qPCR detecta material genético, não necessariamente um organismo vivo e infeccioso, portanto, um resultado positivo em um animal morto ou previamente exposto e curado, ou de contaminação de DNA ambiental de uma amostra, requer interpretação clínica e epidemiológica juntamente com o resultado bruto do teste, em vez de tratar qualquer positivo como prova automática de doença ativa. A especificidade do design de primers e sondas determina se um teste distingue de forma confiável o patógeno alvo de organismos intimamente relacionados e não patogênicos, razão pela qual conjuntos de primers validados e publicados para doenças notificáveis nomeadas têm mais peso diagnóstico do que um ensaio interno não caracterizado.