qPCR病原体诊断

定量PCR (qPCR) 通过重复的酶促复制循环扩增短小的病原体特异性DNA或RNA片段，同时实时测量荧光信号，既确认病原体的存在，又根据达到检测阈值所需的扩增循环次数估算其在样本中的相对数量，循环次数越少意味着初始病原体载量越高。这种速度快（结果在数小时内而非基于培养的细菌诊断所需的数天）、高灵敏度（能够检测远低于引起可见临床症状的感染载量）和定量能力使其成为主要的诊断方法，用于虾类白斑综合征病毒 (WSSV) 等病毒性病原体以及多种难以或无法通过传统实验室方法培养的需报告鱼类病毒。诊断服务购买者应了解的一个关键局限是，qPCR检测的是遗传物质，不一定是活的、有传染性的生物体，因此，对已死亡或先前暴露并已清除的动物，或样本受到环境DNA污染的阳性结果，需要结合临床和流行病学解释来解读原始检测结果，而不是将任何阳性结果自动视为活动性疾病的证据。引物和探针设计的特异性决定了检测是否能可靠地区分目标病原体与密切相关但非致病的生物体，这就是为什么针对已命名的需报告疾病的经过验证、已发表的引物组比未经表征的内部检测具有更高的诊断权重。