تشخيص مسببات الأمراض بتقنية qPCR

تُضخّم تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR) جزءًا قصيرًا ومحددًا لمسبب المرض من الحمض النووي (DNA) أو الحمض النووي الريبوزي (RNA) من خلال دورات تكرار إنزيمية متكررة مع قياس الإشارة الفلورية في الوقت الفعلي، مما يؤكد وجود مسبب المرض ويقدر كميته النسبية في العينة بناءً على عدد دورات التضخيم اللازمة لتجاوز عتبة الكشف، حيث تعني الدورات الأقل حملًا أعلى لمسبب المرض في البداية. هذا المزيج من السرعة (نتائج في ساعات بدلاً من الأيام المطلوبة للتشخيص البكتيري القائم على الزراعة)، والحساسية العالية (قادرة على اكتشاف أحمال العدوى أقل بكثير مما يسبب علامات سريرية مرئية)، والتقدير الكمي جعل من qPCR الطريقة التشخيصية الرائدة لمسببات الأمراض الفيروسية مثل WSSV في الروبيان والعديد من فيروسات الأسماك الزعنفية الواجب الإبلاغ عنها والتي يصعب أو يستحيل زراعتها بالطرق المخبرية التقليدية. من القيود الهامة التي يجب على مشتري خدمات التشخيص فهمها أن qPCR يكشف عن المادة الوراثية، وليس بالضرورة كائنًا حيًا معديًا، لذا فإن النتيجة الإيجابية على حيوان ميت أو تعرض سابقًا للعدوى وتعافى، أو من تلوث الحمض النووي البيئي للعينة، تتطلب تفسيرًا سريريًا ووبائيًا جنبًا إلى جنب مع نتيجة الاختبار الخام بدلاً من التعامل مع أي نتيجة إيجابية كدليل تلقائي على مرض نشط. تحدد خصوصية تصميم البادئ والمسبار ما إذا كان الاختبار يميز بشكل موثوق مسبب المرض المستهدف عن الكائنات الحية وثيقة الصلة وغير المسببة للأمراض، وهذا هو السبب في أن مجموعات البادئات المعتمدة والمنشورة للأمراض الواجب الإبلاغ عنها تحمل وزنًا تشخيصيًا أكبر من الفحص الداخلي غير الموصوف.