การวินิจฉัยโรคแบบ QPCR

การทำปฏิกิริยาโพลิเมอเรสแบบเรียลไทม์เชิงปริมาณ (qPCR) เป็นการเพิ่มจำนวนชิ้นส่วนดีเอ็นเอหรืออาร์เอ็นเอที่สั้นและเฉพาะของเชื้อก่อโรค ผ่านรอบการทำซ้ำทางเอนไซม์หลายครั้ง พร้อมกับการวัดสัญญาณฟลูออเรสเซนต์แบบเรียลไทม์ ทั้งนี้เพื่อยืนยันการมีอยู่ของเชื้อก่อโรคและประเมินปริมาณสัมพัทธ์ของเชื้อในตัวอย่างจากจำนวนรอบการเพิ่มจำนวนที่ต้องใช้ในการข้ามเกณฑ์การตรวจจับ ยิ่งใช้รอบการเพิ่มจำนวนน้อย แสดงว่าปริมาณเริ่มต้นของเชื้อก่อโรคสูงกว่า การรวมกันของความเร็ว (ให้ผลลัพธ์ภายในไม่กี่ชั่วโมง แทนที่จะเป็นหลายวันที่ต้องใช้สำหรับการวินิจฉัยแบคทีเรียโดยอาศัยการเพาะเลี้ยง), ความไวสูง (สามารถตรวจพบการติดเชื้อในปริมาณที่ต่ำกว่าที่ทำให้เกิดอาการทางคลินิกที่มองเห็นได้), และการวัดปริมาณ ทำให้ qPCR กลายเป็นวิธีวินิจฉัยแนวหน้าแบบเด่นสำหรับเชื้อไวรัส เช่น WSSV ในกุ้ง และไวรัสปลาเศรษฐกิจหลายชนิดที่ต้องแจ้งและยากหรือเป็นไปไม่ได้ที่จะเพาะเลี้ยงด้วยวิธีห้องปฏิบัติการแบบดั้งเดิม ข้อจำกัดที่สำคัญที่ผู้ซื้อบริการวินิจฉัยควรเข้าใจคือ qPCR ตรวจจับสารพันธุกรรม ไม่ใช่องค์ประกอบที่มีชีวิตและสามารถติดเชื้อได้ ดังนั้นผลบวกจากสัตว์ที่ตายแล้วหรือที่เคยได้รับเชื้อและหายไปแล้ว หรือจากการปนเปื้อน DNA ในสิ่งแวดล้อมของตัวอย่าง จำเป็นต้องใช้การตีความทางคลินิกและระบาดวิทยาควบคู่ไปกับผลการทดสอบดิบ แทนที่จะถือว่าผลบวกใด ๆ เป็นหลักฐานอัตโนมัติของโรคที่กำลังดำเนินอยู่ ความจำเพาะเจาะจงของการออกแบบไพรเมอร์และโพรบเป็นตัวกำหนดว่าการทดสอบสามารถแยกแยะเชื้อก่อโรคเป้าหมายจากสิ่งมีชีวิตที่เกี่ยวข้องและไม่ก่อโรคได้อย่างเชื่อถือได้หรือไม่ ซึ่งเป็นเหตุผลว่าทำไมชุดไพรเมอร์ที่ได้รับการตรวจสอบและตีพิมพ์สำหรับโรคที่ต้องแจ้งชื่อจึงมีน้ำหนักในการวินิจฉัยมากกว่าการทดสอบภายในหน่วยงานที่ยังไม่ถูกลักษณะนิยาม